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lip2000高效/低毒DNA TR
產(chǎn)品貨號:RL0401
產(chǎn)品品牌:AboRo
產(chǎn)品分類:分子生物學(xué)試劑
產(chǎn)品規(guī)格:1mL
產(chǎn)品價格:799

產(chǎn)品介紹

lip2000高效DNA TR是一種新型的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑適合于將核酸DNA轉(zhuǎn)染入真核細(xì)胞,  具有低細(xì)胞毒性;對多種類型的細(xì)胞和培養(yǎng)板都具有高轉(zhuǎn)染效率;轉(zhuǎn)染時血清的存在不影響轉(zhuǎn)染效率的優(yōu)點(diǎn)。

lip2000高效DNA TR轉(zhuǎn)染試劑對于 常見的哺乳動物細(xì)胞具有非常高的轉(zhuǎn)染效率、重復(fù)性好、  操作簡單、無明顯的細(xì)胞毒性 ,并且對于貼壁細(xì)胞和懸浮 細(xì)胞都適用。

lip2000高效DNA TR主要適用于DNA 等單一成分的細(xì)胞轉(zhuǎn)染。

lip2000高效DNA TR轉(zhuǎn)染過表達(dá)質(zhì)粒后,通常 24-48 h 后達(dá)到較高的蛋白表達(dá)水平, 并且很  多情況下蛋白表達(dá)量在轉(zhuǎn)染后 48 h 顯著高于轉(zhuǎn)染后 24 h;

lip2000高效DNA TR轉(zhuǎn)染細(xì)胞時,    本不受細(xì)胞培養(yǎng)液中血清影響, 即可以在血清存在的情況下  進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。但為了取得最佳的轉(zhuǎn)染效果,推薦轉(zhuǎn)染時使用

不含抗生素培養(yǎng)液。轉(zhuǎn)染后不必去除轉(zhuǎn)染液,或者改變或添加培養(yǎng)基,但轉(zhuǎn)染 4-6 h 后可去除轉(zhuǎn)染液。

使用方法

DNA 轉(zhuǎn)染

對大多數(shù)細(xì)胞來說, DNA(μg)與lip2000高效DNA TR (μl) 的比例為1:2~1:3。轉(zhuǎn)染時高的細(xì)胞密度可以得到高的轉(zhuǎn)染 效率和表達(dá)水平,并能減少細(xì)胞毒性。

1.  24孔板為例

貼壁細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一天,用500μl不含抗生素的培養(yǎng)基接種0.52×105細(xì)胞,使之第二天能達(dá)到80-90%融合。

懸浮細(xì)胞:在準(zhǔn)備DNA-TRLIP2000DNA復(fù)合物之前,用500μl不含抗生素的培養(yǎng)基接種48×105細(xì)胞即可。

2.  對每個轉(zhuǎn)染樣品,進(jìn)行以下操作

a.eppendorf管里分別加入50μlOpti-MEMIReLipcedSerumMedium0.8μgDNA輕柔混勻(不能渦旋或離心),制成DNA稀釋液。

b.在另一個eppendorf管里分別加入50μlOpti-MEMIReLipcedSerumMedium2.0μllip2000高效DNATR(注意用前先混勻),輕柔混勻,制成lip2000高效DNATR稀釋液,室溫靜置5分鐘。

c.DNA稀釋液和lip2000高效DNATR稀釋液混合,輕柔混勻,室溫靜置20分鐘,形成DNA-lip2000高效DNATR復(fù)合物。DNA-lip2000高效DNATR復(fù)合物在室溫下可穩(wěn)定存在6小時。

3.  DNA-lip2000高效DNATR復(fù)合物加入到接種好的細(xì)胞中,將培養(yǎng)板輕輕地前后搖動,使復(fù)合物分散均勻。

4.  37CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6小時后更換培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)1848小時。

5.  如果要篩選穩(wěn)定細(xì)胞株,則在轉(zhuǎn)染24小時后將細(xì)胞按照1:10或更高的比例接種到新鮮培養(yǎng)基中,第二天加入選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。

優(yōu)化 DNA 轉(zhuǎn)染

質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的優(yōu)化 為達(dá)到最高的轉(zhuǎn)染效率和降低細(xì) 胞毒性的影響, 可以對DNAlip2000高效DNA TR的比例以及細(xì) 胞密度進(jìn)行優(yōu)化, 般在1:0.5~1:5的范圍內(nèi)優(yōu)化DNA   (μg)lip2000高效DNA TR (μl) 的比例。


注意事項(xiàng)


1.  使用高純度的DNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。

2.  轉(zhuǎn)染前細(xì)胞必須處于良好的生長狀態(tài)。

3.  需自備不含抗生素的無血清培養(yǎng)液或 Opti-MEM?培養(yǎng)液 或普通的 DMEM 培養(yǎng)液。

4.  lip2000高效DNA TR轉(zhuǎn)染試劑不能vortex 或離心,宜緩慢晃動混勻。

5.  轉(zhuǎn)染試劑使用后請立即蓋好蓋子,避免長時間暴露空氣中。

6.  為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


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